產(chǎn)品
文章
名稱描述內(nèi)容
產(chǎn)品詳情
商品描述
有效期: 5年
溶解性: 10 mg/mL in water
來(lái)源: From horseradish
英文名稱: Peroxidase(POD)
CAS: 9003-99-0
儲(chǔ)存條件: -20℃
酶活/效價(jià): 233-300units/mg solid
外觀（性狀）: 褐色結(jié)晶性凍干粉狀
單位: 瓶
根據(jù)HRP的催化特性，ELISA中一般使用過(guò)氧化氫(H2O2)作為HRP底物之一，在供氫體(即色原底物)存在時(shí)，HRP與H2O2的反應(yīng)迅速而又專一。由圖4可見(jiàn)，HRP被H2O2二價(jià)地氧化形成復(fù)合物I，而復(fù)合物I又可與氫供體的二步連續(xù)的單價(jià)相互作用而還原至起始狀態(tài)。復(fù)合物Ⅱ是被氧化的帶一個(gè)電子的中間產(chǎn)物，當(dāng)H2O2過(guò)量，由于復(fù)合物Ⅲ或Ⅳ的形成，酶活性受抑制(以后補(bǔ)上)。30％的H2O2并不穩(wěn)定。由于H2O2既為HRP的底物，也為其抑制劑，因而ELISA要想得到滿意的測(cè)定結(jié)果，H2O2必須限定在一定的濃度范圍內(nèi)，終濃度通常為2～6 mmol/L。然而在實(shí)際研究工作中，一般很少注意這一點(diǎn)。大多數(shù)研究者所使用的H2O2的濃度常較理想反應(yīng)所需的量大2～4倍。吸附于固相的HRP較游離的HRP更易受過(guò)量H2O2的抑制。如果30％H2O2貯存液濃度經(jīng)測(cè)定證實(shí)確為30％，則稀釋10 000—12 000倍常是較為理想的底物。H2O2的摩爾消光系數(shù)為10mm光徑240nm波長(zhǎng)下為43.6，因此，可通過(guò)這種方式來(lái)檢測(cè)H2O2工作溶液的濃度。
固相ELISA中，當(dāng)溫度高于20oC時(shí)，HRP活性常較低，在底物溶液中加入非離子去垢劑聚山梨醇-20或TritonX-100可延遲HRP的失活，且可使反應(yīng)溫度加大，但非離子去垢劑的這種酶活性保護(hù)效應(yīng)依氫供體的不同而有差異。如以2,2’-聯(lián)氮-雙-[3-乙基苯并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)為氫供體，則只能保護(hù)20％的酶活性，而以鄰聯(lián)茴香胺(ODA)為氫供體時(shí)，酶活性的保護(hù)提高至90％。
HRP之所以是迄今為止在ELISA中應(yīng)用最為廣泛的標(biāo)記用酶，主要是因?yàn)槠湟环矫嬉子谔崛?，價(jià)格相對(duì)低廉；另一方面性質(zhì)穩(wěn)定，耐熱及有機(jī)溶劑的作用，與抗原或抗體偶聯(lián)后，活性很少受損失。
溶解性: 10 mg/mL in water
來(lái)源: From horseradish
英文名稱: Peroxidase(POD)
CAS: 9003-99-0
儲(chǔ)存條件: -20℃
酶活/效價(jià): 233-300units/mg solid
外觀（性狀）: 褐色結(jié)晶性凍干粉狀
單位: 瓶
根據(jù)HRP的催化特性，ELISA中一般使用過(guò)氧化氫(H2O2)作為HRP底物之一，在供氫體(即色原底物)存在時(shí)，HRP與H2O2的反應(yīng)迅速而又專一。由圖4可見(jiàn)，HRP被H2O2二價(jià)地氧化形成復(fù)合物I，而復(fù)合物I又可與氫供體的二步連續(xù)的單價(jià)相互作用而還原至起始狀態(tài)。復(fù)合物Ⅱ是被氧化的帶一個(gè)電子的中間產(chǎn)物，當(dāng)H2O2過(guò)量，由于復(fù)合物Ⅲ或Ⅳ的形成，酶活性受抑制(以后補(bǔ)上)。30％的H2O2并不穩(wěn)定。由于H2O2既為HRP的底物，也為其抑制劑，因而ELISA要想得到滿意的測(cè)定結(jié)果，H2O2必須限定在一定的濃度范圍內(nèi)，終濃度通常為2～6 mmol/L。然而在實(shí)際研究工作中，一般很少注意這一點(diǎn)。大多數(shù)研究者所使用的H2O2的濃度常較理想反應(yīng)所需的量大2～4倍。吸附于固相的HRP較游離的HRP更易受過(guò)量H2O2的抑制。如果30％H2O2貯存液濃度經(jīng)測(cè)定證實(shí)確為30％，則稀釋10 000—12 000倍常是較為理想的底物。H2O2的摩爾消光系數(shù)為10mm光徑240nm波長(zhǎng)下為43.6，因此，可通過(guò)這種方式來(lái)檢測(cè)H2O2工作溶液的濃度。
固相ELISA中，當(dāng)溫度高于20oC時(shí)，HRP活性常較低，在底物溶液中加入非離子去垢劑聚山梨醇-20或TritonX-100可延遲HRP的失活，且可使反應(yīng)溫度加大，但非離子去垢劑的這種酶活性保護(hù)效應(yīng)依氫供體的不同而有差異。如以2,2’-聯(lián)氮-雙-[3-乙基苯并噻唑啉]-6-磺酸(ABTS)為氫供體，則只能保護(hù)20％的酶活性，而以鄰聯(lián)茴香胺(ODA)為氫供體時(shí)，酶活性的保護(hù)提高至90％。
HRP之所以是迄今為止在ELISA中應(yīng)用最為廣泛的標(biāo)記用酶，主要是因?yàn)槠湟环矫嬉子谔崛?，價(jià)格相對(duì)低廉；另一方面性質(zhì)穩(wěn)定，耐熱及有機(jī)溶劑的作用，與抗原或抗體偶聯(lián)后，活性很少受損失。
