試劑盒中單獨出售的成分
Amylose 樹脂
#E8021V 10 ml . ￥1,069
#E8021S 15 ml . ￥1,609
#E8021L 100 ml . ￥7,589
Factor Xa 蛋白酶
#P8010V 25 μg . ￥369
#P8010S 50 μg . ￥729
#P8010L 250 μg . ￥2,889
pMAL-c5X 載體
#N8108S 10 μg . ￥1,019
pMAL-p5X 載體
#N8109S 10 μg . ￥1,019
特性
超過 75% 的蛋白可獲得高效表達，蛋白產(chǎn)量可達 100 mg/L
可在細胞質(zhì)或周質(zhì)中表達：周質(zhì)表達可提高二硫鍵的形成，促進蛋白折疊
增強可溶性：MBP 融合蛋白增強了蛋白質(zhì)在大腸桿菌中的可溶性
采用麥芽糖溫和洗脫：無去污劑或變性劑對蛋白活性產(chǎn)生影響
對于產(chǎn)品詳細描述和 pMAL-p5X 載體圖譜，包括 MCS（多克隆酶切位點），請見目錄 352 頁。pMAL 載體序列文件，請登陸 www.neb-china.com，www.neb.com 查詢。
概述
pMAL 系統(tǒng)是一種高效的蛋白融合表達及純化系統(tǒng)。pMAL 載體含有編碼麥芽糖結(jié)合蛋白（maltosebinding protein, MBP）的大腸桿菌 malE 基因，其下游的多克隆位點便于目的基因插入，表達 N 端帶有 MBP 的融合蛋白。通過“Ptac”強啟動子和 MBP 翻譯起始信號使克隆基因獲得高效表達，并利用 MBP 對麥芽糖的特異性結(jié)合實現(xiàn)融合蛋白的一步親和純化（圖 1）。
此系統(tǒng)的 pMAL 載體在鄰近多克隆位點處含有一段編碼特異性蛋白酶識別位點的序列，從而便于純化后將目的蛋白與 MBP 切割分離，并且目的蛋白不含任何來自載體的氨基酸。為了實現(xiàn)這一目的，多克隆位點中有一限制性內(nèi)切酶識別位點正好位于特異性蛋白酶識別位點處，同時也是目的基因插入的位點。
pMAL 系列載體可從 1 升的培養(yǎng)液中表達出 100 mg 的融合蛋白。大部分情況下，表達出的融合蛋白是可溶的，因為 MBP 已經(jīng)被證實可提高大腸桿菌中表達蛋白的可溶性。盡管沒有一種表達系統(tǒng)適用于所有克隆基因，但 pMAL 蛋白融合表達和純化系統(tǒng)經(jīng)證實：在被檢測的已知蛋白中，有超過 75% 能表達出穩(wěn)定產(chǎn)量。
由于 pMAL-c5X 載體上刪除了 malE 信號序列，因此融合蛋白在細胞質(zhì)中表達。而 pMAL-p5X 載體含有 malE 信號序列，它將引導(dǎo)融合蛋白穿越質(zhì)膜。
圖 1：pMAL 系統(tǒng)流程示意圖。
pMAL 蛋白融合表達和純化系統(tǒng)組成
– pMAL-c5X, pMAL-p5X
– Amylose 樹脂（結(jié)合容量 ~40 mg/柱床體積）
– Factor Xa 蛋白酶
– 抗 MBP 單克隆抗體（用于 Western blot 分析）
– MBP5（SDS-PAGE 電泳用 marker）
– MBP5-paramyosin-ΔSal（Factor Xa 切割對照蛋白）
– E. coli ER2523（NEB 表達用感受態(tài)細胞）
