His標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(His-tag Protein Purification Kit)，俗稱鎳柱試劑盒，是一種采用了新型的
BeyoGold? His-tag Purification Resin的可以兼容還原劑和螯合劑，并能簡(jiǎn)單、快速、高效并且高特異性地純化His標(biāo)簽蛋白的試劑盒。
試劑盒提供了His標(biāo)簽蛋白所需的相關(guān)試劑和親和層析柱空柱管，為His標(biāo)簽蛋白的純化帶來(lái)了極大的便利。
通常帶有6個(gè)組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白(6xHis-tagged recombinant protein)或帶有6個(gè)以上連續(xù)組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白，被稱為His標(biāo)簽蛋白。蛋白樣品溶液通過(guò)BeyoGold? His-tag Purification Resin時(shí)，重組蛋白His標(biāo)簽上的組氨酸殘基能特異性地結(jié)合到BeyoGold? His-tag Purification Resin中的鎳離子上，其它蛋白則不能被結(jié)合。洗滌后，His標(biāo)簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫，從而被分離純化。
BeyoGold? His-tag Purification Resin對(duì)His標(biāo)簽重組蛋白的親和力強(qiáng)、選擇性高、結(jié)合容量大，可以獲得高純度的His標(biāo)簽重組蛋白，可用于簡(jiǎn)單、快速、高效地純化細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲及桿狀病毒等多種表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的His標(biāo)簽重組蛋白。純化的蛋白可以用于結(jié)構(gòu)和功能研究、抗體制備、蛋白與蛋白相互作用、蛋白與核酸相互作用等方面的研究。
BeyoGold? His-tag Purification Resin采用了一種高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠(Sepharose CL-6B)為基質(zhì)，并使用了進(jìn)一步優(yōu)化的接臂和鎳離子螯合技術(shù)，和目前市售的大多數(shù)Ni-NTA agarose或類似產(chǎn)品相比，非特異性蛋白結(jié)合顯著降低，耐受壓力強(qiáng)，鎳離子螯合非常穩(wěn)定。和同類產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品由于鎳離子基本不會(huì)流失，重復(fù)使用本純化介質(zhì)時(shí)不需要重新裝載鎳離子。
Ni-NTA agarose以及絕大多數(shù)類似的鎳柱產(chǎn)品不能耐受蛋白樣品中常見濃度的還原劑如二硫蘇糖醇(DTT)、β-巰基乙醇等以及常見濃度的螯合劑如EDTA等，但BeyoGold? His-tag Purification Resin可以很好地耐受DTT等還原劑以及EDTA等螯合劑。本產(chǎn)品可耐受20mM DTT等還原劑，以及20mM EDTA等螯合劑。這為需要添加還原劑或螯合劑的蛋白樣品的純化提供了可能性。本產(chǎn)品不兼容8M尿素和6M鹽酸胍。對(duì)于包涵體蛋白的純化，在采用8M尿素或6M鹽酸胍溶解蛋白的情況下，需要通過(guò)透析去除尿素和鹽酸胍后才能使用本產(chǎn)品進(jìn)行His標(biāo)簽蛋白的純化。
BeyoGold? His-tag Purification Resin已經(jīng)螯合了鎳離子，呈藍(lán)色，凝膠的顆粒直徑為45-165μm?？赡褪艿淖畲髩毫?.025MPa，約合5.8psi。采用固定流速進(jìn)行蛋白純化時(shí)的推薦流速為0.5ml/min。
BeyoGold? His-tag Purification Resin可以高容量、高特異性地結(jié)合His標(biāo)簽蛋白。最大蛋白結(jié)合量為20-30mg蛋白/毫升凝膠。實(shí)際使用時(shí)的最大結(jié)合量取決于待純化的His標(biāo)簽重組蛋白的分子量大小，分子量越大則最大結(jié)合容量越大，分子量越小則最大結(jié)合容量越小。對(duì)于分子量為50kD的蛋白，每毫升凝膠的實(shí)際最大純化量約為6-10mg，對(duì)于分子量為100kD的蛋白，每毫升凝膠的實(shí)際最大純化量約為12-20mg。但對(duì)于分子量相同的蛋白，也會(huì)因?yàn)榈鞍妆旧硖匦缘牟煌?，結(jié)合的最大容量也會(huì)有所不同。
BeyoGold? His-tag Purification Resin儲(chǔ)存在30%乙醇中，10ml總體積中5ml為凝膠，5ml為液體，需要充分重懸后再吸取。
一個(gè)包裝的本產(chǎn)品足夠進(jìn)行10次His標(biāo)簽重組蛋白純化，每次細(xì)菌沉淀的濕重約為1克。每次蛋白的最大純化量為10-15mg，具體的最大純化量和蛋白分子量有關(guān)；對(duì)于分子量為50kD的帶有His標(biāo)簽重組蛋白，每次的蛋白最大純化量為3-10mg。在不使用親和層析柱空柱管的情況下，參考本說(shuō)明書本試劑盒足夠進(jìn)行500次的小量His標(biāo)簽蛋白純化。
