別名 : 總蛋白提取試劑盒
英文名稱 : Total protein extraction kit
儲(chǔ)存條件 : -20℃
單位 : 盒
全蛋白提取試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取總蛋白，全蛋白提取試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強(qiáng)烈，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。
全蛋白提取試劑盒僅用于科研。
操作方法 ：
1、組織總蛋白的提取
在 1ml 的冷裂解液中各加入 10ul 的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和 PMSF；混勻，放置在冰上備用；稱取 0.1g 的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入 0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；將組織勻漿液移入 1.5ml 的 EP 管中，4 ℃ 12000g 離心 30min；吸取上清至新的管中；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 （提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲(chǔ)存。 ）
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量： 10 7 個(gè)細(xì)胞需要裂解液 1ml； 貼壁細(xì)胞： 棄去培養(yǎng)基， 用冷的 PBS 洗兩次， 棄去 PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，將刮離的細(xì)胞裂解液移入 EP 管中，顛倒裂解 20-30min，懸浮細(xì)胞：4℃ 400g 離心收集細(xì)胞，用冷的 PBS 洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，渦旋 10s，放置冰上裂解 10min，重復(fù) 3-4 次；裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液 4 ℃12000g 離心 30min；將上清移入新的 EP 管中；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 （提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲(chǔ)存。 ）
注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境。
2. PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)?PMSF 在水溶液中會(huì)快速降解。
