產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品中的High Affinity HotStart Taq是TIANGEN Taq DNA Polymerase 和其單克隆抗體的混合制品，適用于HotStart PCR實(shí)驗(yàn)。在PCR反應(yīng)高溫加熱前，Taq單克隆抗體會(huì)與Taq酶結(jié)合，抑制其聚合酶活性。本產(chǎn)品中高親和力抗體可以保證在常溫條件下完全屏蔽Taq酶活性，使整個(gè)反應(yīng)體系具有很高的特異性。另外，本產(chǎn)品中的Taq DNA Polymerase具有較高的模板親和力，可以提高擴(kuò)增的效率以及特異性。10×HA Buffer是特別為該酶所優(yōu)化的PCR反應(yīng)緩沖液，可以保證該酶的最佳性能。5×Probe qPCR Buffer是特別為探針法定量PCR用戶所優(yōu)化的反應(yīng)添加劑，在實(shí)驗(yàn)中配合10×HA Buffer使用，可使本產(chǎn)品用于探針法定量PCR反應(yīng)中，從而使得本產(chǎn)品具有更加廣泛的應(yīng)用范圍。另外，該試劑盒所產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物3’末端為A，可直接用TA載體克隆。
試劑盒特點(diǎn)
1. 高親和體系：High Affinity HotStart Taq是特異性抗體修飾的熱啟動(dòng)型DNA聚合酶，其抗體親和力高；同時(shí)Taq DNA Polymerase具有較高的模板親和力，具有穩(wěn)定的擴(kuò)增效率，和高的特異性；該酶配合精心優(yōu)化的Buffer體系，使得PCR反應(yīng)同時(shí)具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。
2. 穩(wěn)定性強(qiáng)：對(duì)于復(fù)雜模板，低拷貝模板的PCR反應(yīng)以及多重PCR反應(yīng)等普通DNA聚合酶無法完成的實(shí)驗(yàn)，本產(chǎn)品都具有較高的反應(yīng)成功率。
3. 應(yīng)用廣泛：本產(chǎn)品不但適用于普通PCR分析，還適用于定量PCR分析。
儲(chǔ)存條件
收到本產(chǎn)品后，請(qǐng)立即置于-20℃保存。在-20℃條件下，本產(chǎn)品可保存1年。從-20℃取出使用時(shí)，將凍存的10 × HA Buffer和5 × Probe qPCR Buffer融解，然后輕輕顛倒混勻，待溶液完全均一后再行使用。如需一段時(shí)間內(nèi)經(jīng)常取用，可在2-8℃條件下儲(chǔ)存3個(gè)月，但要避免反復(fù)多次凍融。
注意事項(xiàng)
1．在進(jìn)行普通PCR反應(yīng)和染料法定量PCR反應(yīng)時(shí)，不需要額外的加入5×Probe qPCR Buffer，只有在進(jìn)行探針法定量PCR時(shí)才需要額外加入5×Probe qPCR Buffer。
2．在進(jìn)行探針法定量PCR時(shí)，引物終濃度為250 nM，探針終濃度為200 nM可以在大多數(shù)體系中獲得良好的擴(kuò)增結(jié)果。如果需要進(jìn)一步優(yōu)化引物濃度的，可以在50-900 nM范圍內(nèi)調(diào)整；需要進(jìn)一步優(yōu)化探針濃度的，可以在100-500 nM范圍內(nèi)調(diào)整。
工業(yè)客戶實(shí)驗(yàn)例
建立染料法Real-Time PCR反應(yīng)體系： 反應(yīng)程序：
本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用ET108配置的SYBR Green熒光定量試劑對(duì)人Hela細(xì)胞總RNA的GAPDH進(jìn)行熒光定量結(jié)果，cDNA合成應(yīng)用FastQuant RT Kit (KR106)試劑盒，cDNA用量相當(dāng)于20 ng -2 pg的總RNA。
