試劑盒中單獨出售的成分
pKLAC2 載體
#N3742S 20 μg . ￥3,309
SacII
#R0157V 1,000 units . ￥319
#R0157S 2,000 units . ￥619
#R0157L 10,000 units . ￥2,549
K. lactis GG799 感受態(tài)細(xì)胞
#C1001S 5 次反應(yīng) . ￥3,379
酵母碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基
#B9017S 12 g . ￥419
特性
可克隆和表達(dá)對大腸桿菌有毒性的基因
可同時表達(dá)多個基因
無需昂貴的抗生素或甲醇
易操作的實驗步驟，適用于無酵母表達(dá)經(jīng)驗者
有吸引力的商業(yè)授權(quán)
pKLAC2 載體限制性酶切圖譜請參見 351 頁，序列信息請登陸 www.neb-china.com，www.neb.com 查詢。
概述
K. lactis 蛋白表達(dá)試劑盒提供了一種在乳酸克魯維酵母（Kluyveromyces lactis）中表達(dá)目的基因的簡便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合載體中，既可表達(dá)胞內(nèi)蛋白，亦可表達(dá)分泌型蛋白。與其它酵母和細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)相比，K. lactis 蛋白表達(dá)系統(tǒng)有著諸多優(yōu)點。首先，乳酸克魯維酵母具有高培養(yǎng)密度及整合多拷貝質(zhì)粒的能力，使其可成功制備大量的高表達(dá)蛋白質(zhì)；其次，pKLAC1 系列載體使用強 LAC4 啟動子，該啟動子經(jīng)修飾，在大腸桿菌中無背景表達(dá)，因此，可用于對大腸桿菌有毒性的基因表達(dá)；再有，試劑盒提供高效轉(zhuǎn)化的 K. lactis 感受態(tài)細(xì)胞，使得該系統(tǒng)適用于需要大量轉(zhuǎn)化子的實驗，比如利用 cDNA 文庫進(jìn)行表達(dá)克?。涣硗?，酵母轉(zhuǎn)化子的篩選不需要昂貴的抗生素，培養(yǎng)基中也不需要甲醇；最后，K. lactis 細(xì)胞表達(dá)的蛋白質(zhì)可以進(jìn)行翻譯后修飾，因而可成為細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)的有用替代。
pKLAC2 屬于通用表達(dá)載體。利用這些載體既可使重組蛋白在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，也能通過與 K. lactis α-factor 的融合實現(xiàn)分泌表達(dá)。pKLAC2 的多克隆位點與 NEB 其它表達(dá)系統(tǒng)相兼容。
GG799 是 K. lactis 蛋白表達(dá)試劑盒中提供的基礎(chǔ)菌株。其特點是細(xì)胞生長密度與異源蛋白表達(dá)效率極高，GG799 細(xì)胞未經(jīng)遺傳修飾。 
蛋白質(zhì)的分泌過程。在細(xì)胞核中，整合表達(dá)載體編碼了一個含有 ɑ-MF 結(jié)構(gòu)域（藍(lán)色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表達(dá)后，位于 ɑ-MF 上的信號肽就會指導(dǎo)融合蛋白轉(zhuǎn)運至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER），信號肽即被信號肽酶（SP）切除。融合蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運至高爾基體，Kex 蛋白酶在此將 α-MF 結(jié)構(gòu)域切除。隨后，目的蛋白質(zhì)被分泌到細(xì)胞外。
K. lactis 的蛋白表達(dá)。SDS-PAGE 電泳分離檢測分泌性表達(dá)的重組麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP），菌體生長在富含蛋白胨（peptone）的培養(yǎng)基中，直接上樣檢測?？捡R斯亮藍(lán)染色鑒定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 細(xì)胞培養(yǎng)液（15 μl）；泳道 3：整合有大腸桿菌 malE 基因表達(dá)框的 K. lactis 細(xì)胞培養(yǎng)液（15 μl）。
K. lactis 蛋白表達(dá)試劑盒包括
- pKLAC2 載體和 pKLAC1-malE 對照質(zhì)粒
- SacII
- 整合測序引物套裝
- K. lactis GG799 感受態(tài)細(xì)胞和轉(zhuǎn)化試劑
- 酵母碳基礎(chǔ)培養(yǎng)基與乙酰胺溶液
