試劑盒中單獨(dú)出售的成分
Amylose 樹(shù)脂
#E8021V 10 ml . ￥1,069
#E8021S 15 ml . ￥1,609
#E8021L 100 ml . ￥7,589
Factor Xa 蛋白酶
#P8010V 25 μg . ￥369
#P8010S 50 μg . ￥729
#P8010L 250 μg . ￥2,889
pMAL-c5X 載體
#N8108S 10 μg . ￥1,019
pMAL-p5X 載體
#N8109S 10 μg . ￥1,019
特性
超過(guò) 75% 的蛋白可獲得高效表達(dá)，蛋白產(chǎn)量可達(dá) 100 mg/L
可在細(xì)胞質(zhì)或周質(zhì)中表達(dá)：周質(zhì)表達(dá)可提高二硫鍵的形成，促進(jìn)蛋白折疊
增強(qiáng)可溶性：MBP 融合蛋白增強(qiáng)了蛋白質(zhì)在大腸桿菌中的可溶性
采用麥芽糖溫和洗脫：無(wú)去污劑或變性劑對(duì)蛋白活性產(chǎn)生影響
對(duì)于產(chǎn)品詳細(xì)描述和 pMAL-p5X 載體圖譜，包括 MCS（多克隆酶切位點(diǎn)），請(qǐng)見(jiàn)目錄 352 頁(yè)。pMAL 載體序列文件，請(qǐng)登陸 www.neb-china.com，www.neb.com 查詢(xún)。
概述
pMAL 系統(tǒng)是一種高效的蛋白融合表達(dá)及純化系統(tǒng)。pMAL 載體含有編碼麥芽糖結(jié)合蛋白（maltosebinding protein, MBP）的大腸桿菌 malE 基因，其下游的多克隆位點(diǎn)便于目的基因插入，表達(dá) N 端帶有 MBP 的融合蛋白。通過(guò)“Ptac”強(qiáng)啟動(dòng)子和 MBP 翻譯起始信號(hào)使克隆基因獲得高效表達(dá)，并利用 MBP 對(duì)麥芽糖的特異性結(jié)合實(shí)現(xiàn)融合蛋白的一步親和純化（圖 1）。
此系統(tǒng)的 pMAL 載體在鄰近多克隆位點(diǎn)處含有一段編碼特異性蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)的序列，從而便于純化后將目的蛋白與 MBP 切割分離，并且目的蛋白不含任何來(lái)自載體的氨基酸。為了實(shí)現(xiàn)這一目的，多克隆位點(diǎn)中有一限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)正好位于特異性蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)處，同時(shí)也是目的基因插入的位點(diǎn)。
pMAL 系列載體可從 1 升的培養(yǎng)液中表達(dá)出 100 mg 的融合蛋白。大部分情況下，表達(dá)出的融合蛋白是可溶的，因?yàn)?MBP 已經(jīng)被證實(shí)可提高大腸桿菌中表達(dá)蛋白的可溶性。盡管沒(méi)有一種表達(dá)系統(tǒng)適用于所有克隆基因，但 pMAL 蛋白融合表達(dá)和純化系統(tǒng)經(jīng)證實(shí)：在被檢測(cè)的已知蛋白中，有超過(guò) 75% 能表達(dá)出穩(wěn)定產(chǎn)量。
由于 pMAL-c5X 載體上刪除了 malE 信號(hào)序列，因此融合蛋白在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。而 pMAL-p5X 載體含有 malE 信號(hào)序列，它將引導(dǎo)融合蛋白穿越質(zhì)膜。
圖 1：pMAL 系統(tǒng)流程示意圖。
pMAL 蛋白融合表達(dá)和純化系統(tǒng)組成
– pMAL-c5X, pMAL-p5X
– Amylose 樹(shù)脂（結(jié)合容量 ~40 mg/柱床體積）
– Factor Xa 蛋白酶
– 抗 MBP 單克隆抗體（用于 Western blot 分析）
– MBP5（SDS-PAGE 電泳用 marker）
– MBP5-paramyosin-ΔSal（Factor Xa 切割對(duì)照蛋白）
– E. coli ER2523（NEB 表達(dá)用感受態(tài)細(xì)胞）
