● 產(chǎn)品簡介
細菌蛋白提取試劑盒使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌表達的重組蛋白提取。提取過程中不需進行超聲破碎等復(fù)雜的操作步驟，有效避免了外源蛋白的污染。該試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑混合物，可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進行IP、Western blot實驗，也可直接通過Ni-NTA 等純化填料進行蛋白純化。該試劑盒既可適用于小量蛋白表達檢測，也適用于大量蛋白的表達純化試驗；既適用于純化可溶型蛋白，也適用于純化包涵體蛋白。
每次提取使用1ml 緩沖液計算，該試劑盒可以使用100次。
● 使用方法：
一 可溶型蛋白操作方法（1 ml菌液為例）
1. 8,000rpm常溫離心 3min 后，棄上層培養(yǎng)基，留取管底部菌體（盡量棄除掉培養(yǎng)基） 。
2. 加入 200 μl細菌蛋白提取液，2 μl DNase I和4 μl 溶菌酶重懸菌體，用吸頭吹打至無可見細胞團塊。
3. 置于常溫孵育 10-15min，期間輕彈離心管數(shù)次以加速裂解。
4. 裂解完成后 13,000rpm 于4℃離心5 min，將上清轉(zhuǎn)移至新的容器中，溶液可直接進行下一步純化或檢測試驗。
二 包涵體蛋白操作方法（1 ml菌液為例）
1. 上述步驟4 中，棄上清，保留沉淀組分，用200 μl 的細菌蛋白提取液重懸沉淀。
2. 加入4μl溶菌酶，混合均勻，常溫孵育 10-15 min。
3. 加入 800 μl 的滅菌水混合均勻。
4. 13,000 rpm常溫離心5min，棄上清后用 900 μl 滅菌水重懸沉淀，然后加入 200 μl 細菌蛋白提取液，混合均勻。
5. 13,000rpm 室溫離心5 min，重復(fù)步驟4 三至五次。
6. 將沉淀溶解于變性溶液中，進行下一步純化或復(fù)性試驗。
